论文信息
原名：Identification of Aeromonas veronii isolated from largemouth bass Micropterus salmoides and histopathological analysis
期刊：Aquaculture
发表时间：2021年3月
作者：Pei Chao, Song Huali, Zhu Lei
通讯作者：Kong Xianghui
通讯作者单位： College of Fisheries, Henan Normal University.
论文链接：https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2021.736707
关于大口黑鲈维氏气单胞菌的鉴定及组织病理学分析
近年来大口黑鲈在我国得到广泛养殖，然而关于大口黑鲈感染维氏气单胞菌的报道很少。本文报道了2019年3月河南省新乡市的大口黑鲈病例，经鉴定确认为维氏气单胞菌感染，并进行了病原毒力基因和药物敏感性分析。希望本文能够大家提供更多关于维氏气单胞菌研究的相关资料。
维氏气单胞菌Aeromonas veronii：维氏气单胞菌是一种革兰氏阴性短杆菌，菌体两端钝圆，单极鞭毛，具有运动性。能够感染银鲫、鲤鱼、罗非鱼等多种养殖鱼类。受到维氏气单胞菌感染后，病鱼的临床症状包括眼球突出、表皮溃烂和尾鳍脱落，同时内部器官还会出现一些病理变化。
大口黑鲈Micropterus salmoides：原产于北美，是一种优质的淡水鱼类，具有适应性强、生长快、易起捕、养殖周期短等优点，肉质鲜美细嫩，无肌间刺，外形美观，深受消费者青睐，已成为我国重要的经济鱼类品种。
研究内容：
结果
1.自然发病大口黑鲈的临床症状，表现为鳃盖和鳍出血腐烂，背部和腹部溃疡(图1)。
图1 自然发病大口黑鲈的临床症状
2. 从发病的大口鲈鱼中分离到1株革兰氏阴性杆菌（HN1903）。该菌在LB上形成浅黄色、半透明、圆形、凸起、边缘完整的菌落，氧化酶、赖氨酸脱羧酶、Voges-Proskauer、吲哚和柠檬酸呈阳性反应，精氨酸二水解酶、乳糖、水杨素和纤维二糖呈阴性反应，如表2所示。
3. 16S rRNA序列分析发现，HN1903菌株(登录号：MT990643)与模式菌株A.veronii MG438512.1的相似性最高，达99.87%，在系统发育树中聚为一支（图2A和图3）。
毒力基因分析发现，HN1903菌株具有8个毒力基因aerA、gcaT、act、fla、lip、ser、hlyA、ahyB，未检测到4个毒力基因exu、ast、ascV、alt（图2B）。
图2 16SrRNA和毒力基因检测结果
图3基于16SrRNA核苷酸序列的系统发育树
4. 回感试验证实，大部分试验鱼在注射后4~7天死亡，存活率如图4所示。感染鱼表现出与自然发病大口黑鲈相似的症状。结合菌落形态观察、生理生化分析和16SrRNA测序分析，确定从试验感染鱼中重新分离到维氏气单胞菌，且对照组无临床症状和死亡，表明维氏气单胞菌是大口黑鲈的致病菌。
图4 大口黑鲈存活率
5. K-B纸片扩散法结果表明，菌株HN1903对庆大霉素和头孢噻肟敏感，对氟苯尼考和链霉素中度敏感，对卡那霉素、四环素、强力霉素、氨苄青霉素、青霉素G、甲氧苄啶-磺胺甲恶唑、萘啶酸和诺氟沙星耐药(表3)。
6. 组织病理学检查显示肝脏出血坏死，肝细胞间连接受损（见图5a黑色箭头）。肾组织大量炎性细胞浸润（见图5b白色箭头），肾小球坏死（见图5b黑色箭头）。病鱼脾脏中发现大量含铁血黄素颗粒（见图5c黑色箭头）。鳃小片的呼吸上皮细胞坏死(见图5d)。（组织病理学部分原文如此）
图5 组织病理学变化
（A、B、C、D为对照组，a、b、c、d为感染组）
讨论
气单胞菌属(Aeromonas spp.)是能够在水环境中广泛传播的条件致病菌，鱼类个体在受伤或处于应激反应下容易引起感染。维氏气单胞菌HN1903具有aerA、gcaT、act、fla、lip、ser、hlyA和ahyB的毒力基因，这些基因表达的不同毒素和酶可导致宿主细胞损伤和退化。aer基因可损伤肠上皮细胞。细胞毒性肠毒素基因(act)敲除突变体显著降低了引起肠道液体分泌的能力。胆固醇酰基转移酶(gcaT)、脂肪酶(lip)和丝氨酸蛋白酶(ser)是分泌酶，在气单胞菌感染的致病性中起重要作用。溶血素(hly)产生细胞毒效应和红细胞溶解，有助于细菌逃避宿主炎症反应。大多数气单胞菌通过极生鞭毛(fla)活动，鞭毛基因的突变会导致运动性的完全丧失和对细胞的粘附。弹性蛋白酶(ahy)是一种蛋白酶，在生物体的发病机制中也是一个重要的毒力因子。目前分离株中多种毒力因子的组合可能是致病性强的关键因素。
药敏试验表明，该菌株对庆大霉素、头孢噻肟、氟苯尼考和链霉素敏感，对甲氧苄啶-磺胺甲恶唑、萘啶酸和诺氟沙星耐药。尽管维氏气单胞菌所感染的不同鱼类表现出不同的抗药性，但它们都对青霉素和氨苄青霉素具有抗药性。不同分支的菌株对药物的敏感性不同，临床使用前应对选用的抗菌药物的有效性进行检测。
HN1903引起的组织病理学改变主要是肝、脾、肾和鳃的组织变性和含铁血黄素积聚（原文如此）。组织变性可能是由细菌毒素的细胞病变效应引起。含铁血黄素蓄积可能是脾脏血细胞破坏的结果，铁从血红蛋白中释放从而增加含铁血黄素。在感染维氏气单胞菌的尼罗罗非鱼、斑马鱼中也观察到了类似的组织病理学变化。
综上所述，本研究确定分离株HN1903为一株对大口黑鲈有高度致病性的维氏气单胞菌。本研究结果将为该病的诊断、治疗和预防提供新的思路，并有助于了解鱼类气单胞菌的致病机制。
文本：玉洁莹
指导教师：叶仕根
排版：刘娟